柱层硅胶的操作方式
柱层析硅胶的操作方法及注意事项
1.色谱柱填充
操作要点: 装柱前，应在柱底垫一层脱脂棉，防止吸附剂泄漏
有两种方法:千包装和湿包装
(1)安装:柱硅胶通过漏斗不中断地安在中，形成细流，慢慢加入管道，在硅胶也可以用像胶锤轻轻敲击，使硅胶填料连续、均匀、紧密。在装满后，打开活蜜端，倒入洗涤剂洗掉，排出柱内空气，保持一定液位
(2)湿料:将开始使用的淋浴波放)色潜中，打开下活塞，让淋浴波慢慢流出。然后将硅胶慢慢连续地倒入柱中或将硅胶悬浮液和适量的洗脱液慢慢地加入柱中)。硅胶受重力驱动，洗脱液在柱中自由沉降，在此期间，流出的波体应不断地加入到柱中，以保特一定的液位，直到加入硅胶，柱中的沉降不会改变，然后在硅胶。入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量，将洗脱液的液位控制在一定高度。2.上样
将待分离的样品溶解在少量用于装的洗脱波中，制成小体积,高浓度样品溶液，加入色潜的柱层硅胶表面。如果样品不溶于色潜性装挂所用的洗脱液，将样品解在挥发性溶剂中，加入适量硅胶(不超过色潜柱中硅胶总量的1/10)，用它充分混合去除溶剂，将装有样品的硅胶均匀加入柱顶始终保持淋洗液在一定水平)，然后覆盖层硅胶。注意沿柱内壁慢慢加入样品，始终保持柱层硅胶上表面光滑;样品量为硅胶的1/60~1/30。
3.洗脱
通过薄层色谱法选择洗脱液。一般来说TLC显影时Rf值为0.2~0.溶剂系统为良好的洗脱系统，采用梯度洗脱首先，打开色柱下端的活塞，使洗脱液的流速保持在1-2滴/。在上端连续添加洗脱液(可使用分液漏斗控制加入速度与下端相似)，如果单一溶剂的洗脱效果不好可以用混合溶剂(一般不超过三种溶剂 进行洗脱，通常采用梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力从弱到强逐渐增加。4.采集处理
用等于二氧化硅含量的等分试样收集洗脱液。通过薄层定性检查每种洗脱液，并将含有相同成分的洗脱液结合起来。一定的单一成分通常可以通过浓缩和重结晶来获得。如果它仍然是几种单一成分的混合物，单一成分的结晶就不容易沉淀。需要进一步的色谱或通过其他方法进行分离。
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