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柱层析硅胶厂家介绍色谱柱的维护方法有哪些

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柱层析硅胶厂家介绍色谱柱的维护方法有哪些

2019-08-30

1. 色谱柱的平衡 

     反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得的”补偿”,而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤:

    a. 平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)

    b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡; 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

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    2. 色谱柱的再生

     长期使用的色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。  

    建议用来冲洗柱子的溶剂体积

    色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积

    125-4mm 1.6ml 30ml

    250-4 mm 3.2ml 60ml

    250-10mm 20ml 400ml

    选择再生方法:

    极性固定相(如Si,NH2* ,DIOL基色谱填料)的再生:

    正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

    非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生: 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

柱层析硅胶厂家介绍色谱柱的维护方法有哪些

    注意:

    a. 柱层析硅胶厂家在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 

    b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

    3. 色谱柱的维护 

    a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

    b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不大于该色谱柱的pH范围

    c.避免流动相组成及极性的剧烈变化

    d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理

    e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中

    f.氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。


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