柱层析硅胶操作方法
柱层析硅胶操作方法:
匀浆法:
1.称重:200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果很难区分,也可以用100倍的硅胶H。干硅胶的视密度约为0.4,所以可以称之为40g硅胶,烧杯量为100毫升。
2.搅拌均匀浆料:用玻璃棒充分搅拌干硅胶体积的两倍溶剂。如果洗涤剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系统,则与石油醚混合;如果洗涤剂是氯仿/醇系统,则使用氯仿。如果不能搅拌均匀浆料,则表明溶剂含水量过高,特别是乙酸乙酯/丙酮。如果不与水配伍,则须提前用无水硫酸钠长期干燥。氯仿用无水氯化钙干燥,以去除1%的醇。如果样品对酸敏感,则不能使用氯仿系统通过柱。
3.安装柱子:用棉花塞住柱子底部,无需使用海砂。加入约1/3体积的石油醚(氯仿),安装储液球,打开柱下活塞,一次将匀浆倒入储液球中。随着沉降,一些硅胶会粘在储液球上,并用石油醚(氯仿)冲入柱中。
4.压实:沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床大约被压缩到9/10体积。无论是常规压力柱还是加压柱,都应采取这一步骤,这可以大大提高分离度,避免柱床柱时萎缩引起的开裂。
5.样品:干湿法可以。海沙是不必要的。取样后,加入一些洗涤剂,然后将一团脱脂棉塞到硅胶表面附近。然后你可以添加大量的洗涤剂,而不会破坏硅胶表面。
6.过柱和收集:柱层分析实际上是扩散和分离之间的权衡。洗涤强度过低不好。建议使用梯度洗涤。收集例:10mg样品量,1g硅胶H,0.5ml蒸馏;1-2g样品量,50g硅胶(200-300目),20-50ml蒸馏。
7.检测:多使用专用喷雾剂。如果只使用紫外线灯,会损失更多的产品。紫外线的灵敏度一般比喷雾剂底部高1-2个数量级。
8.发光谱:收集到的产品通常需要在发光谱新结晶。如果样品太少或液体,可以通过一个小凝胶柱作为送谱前的净化手段。所谓的硅胶峰可以去除氢谱约1.5ppm。
干式样品一般用于固体或高粘度的液体样品。样品用低沸点易溶剂溶解,加入1-3倍厚硅胶,干燥或旋转干燥。干燥的标准是将硅胶制成细粉,而不是粘在瓶壁上。在安装好的柱子上留下溶剂,慢慢进入吸附样品的硅胶,振动柱子或添加一些溶剂,清洗粘在柱壁上的硅胶。
安装柱子时,无论是湿法还是干法,用节橡胶管敲打,使柱子安装均匀。只有柱子安装均匀,分离效果才能好。
一般柱下的死体积太大,太大,许多分离的物质被重新组合在一起,导致分离失败。RF值超过柱,这取决于分离化合物的情况。如果产品相对干净,杂质点相距较远,则RF值可以较大或分离。如果杂质点较多,TLC距离较近,RF值应较小,为0.1~0.2。
压力可以提高洗涤剂的流动速度,减少产品收集时间,但也可以减少柱子的塔板数量。
当其他条件相同时,常压柱效率高,但时间也长,如天然化合物的点。
离开,一根柱子个月也有。
减压柱可以减少硅胶的使用,感觉可以节省一半或更多,但由于大量的空气通过。
硅胶会使溶剂挥发(有时在柱外有水蒸气凝结),以及一些更容易分解的东西。
不,还须同时使用泵(噪音大,时间长)。以前有很多。
减压柱,对它有很深的感情,但自从尝试加压以来,几乎再也没有动过减压的念头。
头了。
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