手把手教你如何对柱层析硅胶分离!
常说的过柱子应该叫柱层析硅胶分离, 也叫柱色谱。 我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经历成分太多,就关于色谱柱的运用,一同来看看吧:
柱子可以分为:加压,常压,减压:压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品搜集的时刻,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是功率很高的,但是时刻也长,比如,天然化合物的分别,一个柱子几个月也是有的。减压柱可以减少硅胶的运用量, 感觉可以节约一半乃至更多,但是,由于许多的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解的东西或许得不到,而且还需要一同运用水泵抽气(很大的噪音,而且时刻长)。早年早年许多的过减压柱,对它有比较深沉的爱情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法,与常压柱相似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的供给可所以压缩空气,双连球或许小气泵(给鱼缸供气的就行)。特别是在简略分解的样品的分别中适用。压力不可过大,否则溶剂走的太快就会减低分别作用。个人觉得加压柱在一般的有机化合物的分别中是比较适用的。
关于柱子的尺度,应该是又粗又长的好:柱子长了,相应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上便是样品层比较薄),这样相对的减小了分别的难度。试想假设柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分别的难度可想而知,恐怕要用很低的溶剂渐渐冲了。而假设样品层只有 0.5 厘米,那么各组分就比较简略得到完全分别了。当然选用粗大的柱子要献身比较多的硅胶和溶剂了,不过这些本钱相对于产品来说或许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分糟蹋)。现在见到的柱子径高比一般在 1:5~10,书中写硅胶量是样品量的 30~40倍,详细的选择要详细分析。假设所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分 rf 在0.2~0.4,杂质相差0.1 以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如,200 毫克的样品,用50px×500px的柱子);假设,相差不到 0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如,用 75px 的,也可以减小淋洗剂等等关于无水无氧柱,适用于对氧,水灵敏,易分解的产品。
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